CBB™类多巴胺能神经元诱导分化培养基说明书
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CBB™类多巴胺能神经元诱导分化培养基说明书

CBB™多巴胺能神经元诱导分化培养基,是一种成分确定且不含血清的新型神经元诱导分化培养基,包含了间充质干细胞向多巴胺能神经元分化的基础成分和所需添加物,能够满足多种间充质干细胞向多巴胺能神经元细胞分化生长的营养需求,实现间充质干细胞向类多巴胺能神经元的分化。该培养基可更好地支持间充质干细胞衍生的多巴胺能神经元细胞在体外的功能,增强神经元在体外培养的生理相关性,进而提升实验研究向临床应用的转化成功率。CBB™培养基中加入了适量的神经元添加物、细胞因子及小分子化合物,可应用于多种神经元的分化培养,产品广泛适用于小鼠、大鼠、人的多种组织来源间充质干细胞。
产品详情

产品概览及工作流程:

在分化过程中,MSC会首先在CBB培养基中被诱导分化为成熟的类多巴胺能神经元细胞。整个分化过程大约需要 14 天(图1)。

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图1. 简化的工作流程图(MSC细胞诱导过程中的时间轴及各阶段的形态变化)。在CBB培养基中培养的MSC可被特异性诱导成中脑底板、

扩增并储存起来,随后成熟为多巴胺能神经元,为期约14天。


实验数据:

实验结果显示,经过14天CBB™培养基培养诱导的MSC分化成的类多巴胺能神经元可维持中脑的特性(图2,图3)、具有与已经发表的实验方法生成的神经元相同的基因表达谱(图4),并展现出自发性动作电位以及在去极化时释放多巴胺的功能性(图5)。

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图2. 成熟 DA神经元的代表性图像。以下图像是在加入CBB类多巴胺能神经元诱导分化培养基第7天,用人多巴胺能神经元免疫细胞化学试剂盒随附染色试剂而获得的。

大部分表达 TH 的神经元也共表达了 FOXA2。(A)抗 TH(绿色)。(B)抗 FOXA2(红色)及 NucBlue 染色(核 DNA DAPI染色)(蓝色)。(C)抗 TH 与抗 FOXA2

(绿色与红色)的合并图像。

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图 3. 人iPSCs的生物学特征鉴定 Fig.3 Biological characterization of hiPSCs. A: hiPSCs express pluripotency markers OCT4, SOX2, SSEA1 and Nanog (immunofluorescence assay). 

B: Chromosome G-banding of hiPSCs showing chromosomes at the metaphase (left) and the karyotype(right). C: AP-positive dense cell colonies of hiPSCs. 

D: Expression of pluripotency markers detected by RT-PCR and Western blotting.

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4. 关键基因的基因表达谱与通过发表的实验方法而生成的神经元相当(Kriks 分化后第 48 天与 DA 神经元分化后第7天)

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5. 通过 HPLC 评估分化神经元中的自发性及去极化诱导的多巴胺释放。通过 HPLC 测定自发性及由去极化诱导的多巴胺释放,以评估分化神经元的功能。

收集条件培养基(第 12 至 14 天),测定自发性多巴胺释放。在 37°C 将 DA 神经元在 Hank 平衡盐溶液 (HBSS) 或含有 56 mM Kcl 的 HBSS 中孵育 15 分钟,

可实现去极化诱导的多巴胺释放。分化的 DA 神经元不仅能产生多巴胺(条件培养基),还可通过加入过量 K+ 引起的电压门控刺激释放多巴胺。