培养皿使用方法：

本产品适用的细胞系包括但不限于：人脐带来源的间充质干细胞、人脂肪来源的间充质干细胞、人骨髓来源的间充质干细胞、人来源的皮肤成纤维细胞。但使用本产品制备本说明规定以外的其他细胞系的细胞薄膜，其体外培养条件以及所使用培养基需要相应做出调整，建议客户在使用本产品时应特别注意。

客户在购买并收到产品后，请检查无菌外包装是否破损，培养皿结构是否出现破碎或者裂痕，是否存在目检可见的污染物等，若存在上述问题请勿继续使用本产品。

由于实验所用试剂、操作环境以及操作手法的差异，下列方法仅供客户参考，以人脐带来源的间充质干细胞为例：

1. 细胞接种

(1）本例中所使用的人脐带来源的间充质干细胞的最佳培养代数为7代及以下。对于人脐带来源的间充质干细胞，本说明推荐使用的完全培养基为Takara Cellartis人间充质干细胞培养基（Xeno-Free级别，Cat.No Y50200），并加入抗坏血酸至浓度为50μmol/L。取本产品按照表-1所建议的细胞密度进行接种。将培养皿放入37℃、5%二氧化碳、湿度饱和的细胞培养箱中培养。

(2）定期观察细胞生长状态，待细胞生长至过饱和状态后（100%融合度），可用于进行下一步操作。

2. 细胞薄膜的分离和提取

(1）吸出培养皿中的培养基，取等量D-PBS缓缓加入培养皿中洗除残留培养基。

(2）从边缘缓缓吸出D-PBS，取出一片符合培养皿大小的支撑物（此处插入货号）并小心地将其放入培养皿中。在放入过程中应避免支撑物与细胞薄膜表面发生摩擦，从而破坏细胞薄膜的完整性。

(3）向支撑物的表面缓慢滴加D-PBS，在浸润支撑物的同时使得D-PBS完全覆盖培养皿表面。

(4）室温下静置孵育20分钟（注意，不同细胞系细胞薄膜所需的孵育时间可能不同，需要根据具体细胞系进行优化。

(5）孵育完成后，以洁净镊子夹起支撑物边缘，将支撑物连同细胞薄膜一起揭下。即可看到贴附于支撑物的细胞薄膜。

(6）将细胞薄膜连同支撑物转移至移植处表面，如损伤皮肤、器官、或洁净培养皿表面，以0.9%氯化钠注射液缓缓冲洗支撑物的无细胞面，促进细胞薄膜和支撑物的分离。待细胞薄膜与支撑物分离并贴附于目标移植处表面，移除支撑物。

注意事项

(1) 在整个细胞培养以及操作过程中，请注意保持无菌操作。

(2) 本说明所推荐的细胞使用代数为7代以及以下。

(3) 为达到最佳的成膜以及脱膜效果，培养细胞所用培养基中应适当加入抗坏血酸至浓度为16-60μmol/L。